参赛网友：xiaodu2891

实验室名称（选填）：广州市神经科学研究所

是否采用密理博Immobilon转印膜（必填）：已采用

PVDF膜孔径：0.22 uM / 0.45 uM （任选） 0.22um

使用抗体（必填）：一抗为LIMK1（sigma公司）货号L2290

其他实验试剂：ECL发光液（碧云天)

实验步骤（样品及检测底物必填）：小鼠脑组织，HRP标记羊抗兔__
1、蛋白质量是成功的第一步
2、电泳条件120V（恒压）20min，100v分离胶 50min
3、转膜条件：湿转2h，100v（恒压）
4、封闭：5%脱脂奶粉，RT,1h
5、一抗孵育：4度，过夜（一抗最关键，质量好的抗体+合适的稀释度+反应条件）
6、二抗孵育：RT,1h，避光
以上是做WB的基本条件和步骤，然后根据不同的蛋白再适当调整。

实验心得（选填，有助于获得选票）：
1、抗体是最重要的（选了好几个公司的抗体，最后买了sigma的才做出来）
2、ECL发光需选择不同时间点
3、目的蛋白的提取是核心

参赛图片（附图，请清晰标注样品及对照 ）
注：图中不同条带为不同年龄小鼠脑组织样品
上面8条带为LIMK1条带
下面8条带为actin内参条带