wh2008

来源:未知作者:admin时间:2010-11-03 11:08点击:

参赛网友:wh2008

实验室名称:未知

 
是否采用密理博Immobilon转印膜(必填):密理博PVDF膜  
            
PVDF膜孔径: 0.45 uM 
 
使用抗体(选填): HO-1(Millipore公司, AB1284),beta-actin为Santa Cruz公司(sc-47778)
 
其他实验试剂:ECL发光液购于Pierce公司(M34095)
 
实验步骤(样品及检测底物必填):小鼠胎盘组织,匀浆,蛋白定量至10ug/ul;浓缩胶是5%,分离胶是12.5%;电泳条件是55v*50min和110v*1.5h;转膜条件是200mA*4h;一抗是1:2000,室温2h,而二抗是1:4万,室温1.5h;底物是Pierce公司fg级的ECL化学发光液。
 
实验心得:
1、一定要掌握整个实验原理,注重每一个实验细节;
2、最关键的因素是抗原和抗体。前者主要包括蛋白定量后的终浓度和上样量,后者包括一抗和二抗稀释度、孵育时间和孵育温度;
3、实验室要有一套Western blotting标准操作规程(SOP),而且需要不断优化和更新;
4、 除SOP外,实验技能(手法)、抗体和发光液等试剂质量等也是影响因素。
 
参赛图片 
 
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