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来源:未知作者:admin时间:2010-12-13 12:06点击:
是否采用默克密理博Immobilon转印膜:是
PVDF膜孔径:0.45 uM
使用抗体:
鼠抗人Bcl-2蛋白单克隆抗体(Millipore,P10415)
鼠抗人β-actin单克隆抗体(Santa cruz, sc-130301)
其他实验试剂:10%过硫酸胺(AP)、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、化学发光试剂。
实验步骤:
配10%的分离胶灌胶,待分离胶凝固后再加入4%浓缩胶,向定量蛋白中加入1/5体积上样缓冲液,电泳分离蛋白,将蛋白电转移至PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST封闭4h或4℃封闭过夜, 洗膜后加入1:150的鼠抗人Bcl-2蛋白单克隆抗体,37℃下孵4小时,再次洗膜,用1:2000的二抗稀释液室温下孵1h,充分洗膜后显色、显影、定影。
实验心得:
加样不能太快,以免使样品冲出加样孔;放置PVDF膜于甲醛液中侵泡时要轻放,待其自然置于液面上方;根据荧光强弱调整曝光时间,一般1-5分钟即可。
参赛图片:
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20世纪80年代,默克密理博公司进入中国市场。先后在香港、北京、上海、广州、成都及深圳设立了办事机构,并于2000年4月在上海浦东外高桥保税区建立了默克密理博(上海)贸易有限公司。 目前,默克密理博在中国拥有近150名员工,从事应用销售、市场推广、维修服务和技术支持等工作。
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