medictxj

来源:未知作者:admin时间:2010-12-13 12:06点击:

是否采用默克密理博Immobilon转印膜:是            

PVDF膜孔径:0.45 uM

使用抗体:

鼠抗人Bcl-2蛋白单克隆抗体(Millipore,P10415)

鼠抗人β-actin单克隆抗体(Santa cruz, sc-130301)

其他实验试剂:10%过硫酸胺(AP)、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、化学发光试剂。

实验步骤:

配10%的分离胶灌胶,待分离胶凝固后再加入4%浓缩胶,向定量蛋白中加入1/5体积上样缓冲液,电泳分离蛋白,将蛋白电转移至PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST封闭4h或4℃封闭过夜, 洗膜后加入1:150的鼠抗人Bcl-2蛋白单克隆抗体,37℃下孵4小时,再次洗膜,用1:2000的二抗稀释液室温下孵1h,充分洗膜后显色、显影、定影。

实验心得:

加样不能太快,以免使样品冲出加样孔;放置PVDF膜于甲醛液中侵泡时要轻放,待其自然置于液面上方;根据荧光强弱调整曝光时间,一般1-5分钟即可。

参赛图片: 

 

 

发表评论 查看所有评论
*你的姓名: (请留下你的姓名和邮件,以方便我们及时给你发送奖品。)
*电子邮件:
 验证码:
*留言内容:
(1000字以内)