实验室名称（选填）：协和医学院血研所_

是否采用默克密理博Immobilon转印膜（必填）：是　

PVDF膜孔径：0.22 uM / 0.45 uM （任选）0.45uM

使用抗体（选填）：anti-phosphotyrosine, clone（4G10）# 05-321

其他实验试剂：millpore HRP 发光底物

实验步骤（样品及检测底物必填）：___血液肿瘤细胞_________

实验心得：

实验过程中，关键注意点
样品制备时，用磷酸酶抑制剂抑制磷酸酶的去磷酸化作用；
膜必须用0.45uM 的，否则背景会很高；
由于这是全蛋白酪氨酸磷酸化水平的检测，电转采用小电流低电压长时间转膜，我主要观察25-115KD之间蛋白，采用1mA/cm2的电流，2h 半干转移；
脱脂奶室温封闭1h，时间不宜过长；
一抗5%BSA的TBST，1：1000稀释，最好4度过夜；
洗涤采用短时间多次，5min/次，5次，这样有利于减低背景；
二抗TBAT，1：5000稀释，中杉分装羊抗鼠二抗。

参赛图片（附图，请清晰标注样品及对照 ）