参赛网友：woshiwo61

实验室名称（选填）：北京大学医学部

是否采用密理博Immobilon转印膜（必填）：是　
　　　　　　　　　　　　
PVDF膜孔径：0.22 uM / 0.45 uM （任选）0.45

使用抗体（必填）：_Flotillin_（BD）_

其他实验试剂：增强型ECL发光液（Pierce）

实验步骤（样品及检测底物必填）：
 

样品：小鼠脑组织；梯度蔗糖分离体系分离脂筏，从1到10组分，样品蔗糖含量逐渐增高。
底物：HRP标记山羊抗小鼠。

实验心得（选填，有助于获得选票）：
1，  蛋白电泳顺序，在积层胶低电压（60V）；分离胶用高电压（120V）；蛋白分开到理想状态前或后低电压（60V）再跑一段时间，使条带更实、齐。
2，  抗体封闭液，一般使用5%脱脂奶粉；然而有些抗体需要使用BSA作为封闭剂，需要仔细看说明书，再进行选择。
3，  抗体孵育，一抗四度过夜；二抗四度4-6小时，结果更加稳定；视不同抗体和具体情况，室温孵育需要摸条件。
4，  ECL孵育PVDF膜的同时，可以在暗室观察膜上是否有条带，防止信号过量，发光的时候由于荧光淬灭条带不完整；同时可以判断最好信号的孵育时间。
5，  抗体的特异性非常重要，推荐根据阅读的可靠文献选择抗体，一旦出现问题可以与公司技术支持交流找到解决问题方案。

参赛图片（附图，请清晰标注样品及对照 ）
脂筏组分分离：
对照：1-3组分
脂筏：4-5组分
过度：6-8组分
非脂筏：9-10组分